lunes, 13 de abril de 2015

PROTOCOLO DE TINCIONES IV PANÓPTICO RÁPIDO

Se utiliza principalmente para la tinción de frotis sanguíneos, y en AP para las PAAFs.
Esta técnica permite diferenciar los principales tipos celulares que encontramos en sangre o en citologías.


Se comercializa como un kit que incluye 3 líquidos diferentes:
  1.  Líquido 1 FIJADOR: Solución alcohólica de triarilmetano.
  2.  Líquido 2 Colorante ÁCIDO (rojo): Solución tamponada de xanteno.
  3.  Líquido 3 Colorante BÁSCIO (azul): Solución tamponada de tiazina.

Reactivos.


a) Los colorantes catiónicos (básicos) se unirán a las estructuras ácidas-basófilas, y quedaran en onos azulados.
b) Los colorantes aniónicos (ácidos) –fundamentalmente la eosina- se unirá a las estructuras básicas-acidófilas-eosinófilas.
c) Los componentes celulares que tienen afinidad por ambos tipos de colorantes, quedaran en tonos
violeta.


Resultado en muestras hematológicas:


  •  Eritrocitos: color rosa pálido a beige.
  •  Plaquetas: color violeta claro.
  •  Neutrófilos: núcleo violeta oscuro, citoplasma violeta claro con gránulos violeta oscuro.
  •  Basófilos: núcleo violeta oscuro, gránulos violeta oscuro.
  •  Eosinófilos: núcleo violeta oscuro, citoplasma violeta con gránulos rojizos- violeta.
  •  Linfocitos: núcleo violeta oscuro, citoplasma un poco más claro.
  •  Monocitos: núcleo violeta oscuro, citoplasma un poco más claro.



Citología



Protocolo para extensiones de sedimento urinario:


1) Obtener orina en un bote de recogida (bote de boca ancha con tapón habitualmente verde o rojo).

2) Descartar la primera parte de la micción y recoger el resto.

3) Tomar 8 mL de orina y transferirlos a un tubo de centrífuga.



4) Centrifugar a 1500-2000 rpm durante 10 minutos.

5) Eliminar el sobrenadante (con una pipeta pasteur iremos eliminando progresivamente y lo
devolveremos al bote de orina).

6) La última gota la usaremos para resuspender el sedimento, lo recuperaremos SIN DESPEGAR LOS DEDOS TOTALMENTE DE LA PIPETA, y la depositaremos sobre un porta, cerca del extremo.

7) Con ayuda de otro porta, la extenderemos.

8) Dejamos secar al aire.

9) Teñimos con panóptico rápido.



Protocolo tinción:

1)  Realizaremos una buena extensión de sangre/orina, que dejaremos secar al aire.

2) Preparamos la batería de tinción etiquetando tres cubetas Coplin, que llenamos con los líquidos del kit en el orden establecido o cuatro cubetas en el caso que deseemos lavar con agua en esta última.

Reactivo 1: Fijación: 5 inmersiones de 1 segundo (introducir el porta en la cubeta durante un segundo y sacar, repetir 5 veces), escurrir en papel empapante.

Reactivo 2: 5 inmersiones de 1 segundo, escurrir en papel empapante.

Reactivo 3: 5 inmersiones de 1 segundo, escurrir en papel empapante.

3) Lavado: Ponemos el porta bajo el chorro del agua, de manera que no incida directamente sobre las células para no deteriorar la extensión o sumergimos en la cuarta cubeta llena de agua.

4) Secado: al aire, posición 45º inclinada y con la extensión hacia la cara interior.
No es necesario montar. Si se desea conservar, llevar a xilol y montar con resina (Eukit).


Esquema: 


1 comentario:

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