PROTOCOLO DE TINCIONES II TRICRÓMICO DE MASSON.

Es una técnica de coloración especial que permite visualizar claramente las fibras de colágeno tipo I,,, también evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares.
En esta técnica se emplean tres colorantes para diferenciar el núcleo celular, el citoplasma y las fibras de colágeno: Hematoxilina, fuxina de Ponceau y azul de Anilina.

Mesa de tinción tricrómico.

• Núcleos: AZUL OSCURO 
• Citoplasmas, queratina, fibras musculares, eritrocitos: ROJO (rosado) 
• Colágeno y fibras de reticulina (colágeno III): AZUL CLARO o verde (depende del colorante)

Protocolo:

1) Desparafinación en la estufa 60ºC durante 10 min y posteriormente en líquido intermediario, Xilol, en tres coplins diferentes durante 5 min cada uno.

2) Hidratación con alcoholes en concentraciones decrecientes, del 96%, 80% y 60%, un min cada uno.

3) Lavar con agua corriente.

Es conveniente mirar la superficie de los cristales para asegurarse de que la muestra está totalmente hidratada.

4) Hematoxilina durante 5 min.

Previamente filtrada.

Unos segundos antes de que acabe el proceso trasladar el coplin a la pila, rellenar otro coplin con agua del grifo donde depositaremos las muestras y aplicaremos el chorro de agua hasta que el esta salga transparente.

Chorro de agua incidiendo en esquina del coplin.

Posteriormente volver a la bancada de tinciones con el coplin y las muestras.

5) Fucsina de Ponceau 5 min.

A continuación se aplicará un baño de agua corriente hasta eliminar el exceso de colorante y después otro de agua acética 1% muy rápido.

6) Ácido fosfomolibdico 5 min.

Posteriormente baño en agua acética 1%

7) Azul de Anilina 10 min.

A continuación se aplicará un baño de agua corriente.

Después otro de agua acética 1%.

Y para finalizar agua corriente.

8) Deshidratar con alcoholes a concentración creciente, 60%, 60% y 80% rápido y un baño de 100% durante 5 min.

9) Xilol tres pasos de 5 min cada uno.

10) Medio de montaje.


Esquema: