PROTOCOLO DE TINCIONES I HEMATOXILINA EOSINA.

Esta tinción es una de las más utilizadas en laboratorios de anatomía patológica.
Consta de dos colorantes:

• Hematoxilina

De carácter catiónico o básica, por lo que tiñe estructuras ácidas (basófilas) en tonos azul y púrpura.

• Eosina.

Tiñe componentes básicos (acidofilas) en tonos de color rosa, gracias a su naturaleza aniónica o ácida.

Reactivos ematoxilina y eosina.

Estructuras que tiñe:

• Núcleo celular: Violeta
• Citoplasma: Rosa
• Musculatura: Rojo , rosa o fucsia
• Glóbulos rojos: Rojo, anaranjado
• Fibrina: Rosa

Protocolo:

1) Previamente tendremos que elaborar un filtro para la hematoxilina.

2) Desparafinar las muestras.
Este paso se realiza en dos tandas: la primera en la estufa 60ºC durante 10 min y posteriormente líquido intermedio, Xilol, tres baños de 10 min cada uno.
Asegurarse durante todo el proceso que los diferentes reactivos cubran por completo las muestras de no ser así, agitar el cestillo con las muestras de forma vertical, de arriba a abajo.
Una vez finalizado este paso, no olvidar escurrir el cestillo en papel empapante con la intención de evitar contaminar los diferentes reactivos.

Estufa.

Muestras en la estiua a 60ºC

3) Hidratar con una batería de alcoholes a concentraciones decrecientes (de 100% al 50%) tres minutos por cada coplin de alcohol.
Ir observando la superficie del cristal.

Un par de coplins de alcoholes.

4) Agua, en nuestro caso la utilizamos del grifo ya que el agua de Valencia es rica en calcio.
En este paso es imprescindible prestar atención a la superficie del cristal. Agitar enérgicamente el cestillo hasta que en esta no se encuentre uniforme.

5) Hematoxilina, tiempo estimado de 3-5 min.
Unos segundos antes de que finalice el tiempo tendremos que transportar el coplin con la hematoxilina y las muestras a la pila, donde pasaremos el cestillo a otro coplin y rellenaremos este de agua del grifo a chorro constante hasta que el agua salga transparente. 

Hematoxilina en la pila con el chorro de agua cayendo.

Tener la precaución de evitar que el chorro de agua no incida directamente en las muestras, ya que esto podría dañar las muestras.

El chorro a un lado sin dañar las muesttras

Añadir agua hasta que salga transparente.

 Una vez el agua del coplin se aprecie transparente se trasladará de nuevo a la mesa de tinción para continuar con el protocolo.

6) Diferenciación con ácido clorhídrico.
En este caso, la estancia de las muestras en el reactivo sera muy rápida.

7) Neutralización con bicarbonato.
Debido a nuestra localización geográfica,en nuestro laboratorio utilizamos agua del grifo.

8) Eosina, de 30 segundos a 3 min.

9) Lavar en agua corriente.
Este proceso también será con la mayor rapidez posible, de lo contrario se podría perder el color.

10) Deshidratación a concentraciones crecientes de alcohol (del 50% al 100%).
Desde los 50-96% las muestras estarán en contacto con el líquido una vez durante 30 segundos, mientras que al 100% se dejarán reposar las muestras en tres coplins diferentes durante 10 min cada uno.

11) Líquidos intermedios, Xilol.
Tres coplins diferentes y cinco min por coplin.

12) Para finalizar montaremos las muestras con líquido de montaje Eukitt.

Líquido de montaje.

Muestras recién montadas.

Protocolo esquemático: