La modificación química del tejido consiste en la oxidación mediante el ácido periódico (HIO4) de los enlaces entre los carbonos próximos que contienen grupos hidroxilos (glicoles vecinales).
Esto provoca la formación grupos aldehídos que serán reconocidos por el reactivo de Schiff, el cual se combinará con ellos para dar un color rojizo brillante.
Entre los componentes del reactivo de Schiff está la pararosanilina, un componente de la fucsina básica, tratada con ácido sulfúrico; el compuesto final se denomina ácido sulfofucsídico.
Oxidamos los alcoholes que están en posición 1,2 glicol a carbonilo, que reaccionarán con el reactivo de Schiff al haberse convertido en grupos aldehído.
Una gran ventaja de la tinción histoquímica PAS es su capacidad de discriminación de tipos de glúcidos distintos, con pequeñas modificaciones de la técnica.
Reactivos:
Preparación:
1) Fijación: Formol al 4 % o Líquido de Carnoy o Bouin.
2)Disolver la fucsina en 200 ml de agua destilada hirviendo.
3) Dejar enfriar hasta aproximadamente 50º C. y filtrar
4) Posteriormente agregar 20 ml de HCl 1N. Después enfriar hasta 25º C y añadir 1g de Bisulfito sódico o Metabisulfito potásico (sódico).
5) Mantener en la oscuridad. El liquido tarda unos 2 días o a veces 24h en tornarse de color amarillo que indica que está listo para su uso.
6) Añadir 2g de carbón activado, mezclar y filtrar hasta que desaparezca el color.
7) La solución debe conservarse en el refrigerador protegido de la luz.
Técnica de Tinción:
Esto provoca la formación grupos aldehídos que serán reconocidos por el reactivo de Schiff, el cual se combinará con ellos para dar un color rojizo brillante.
Entre los componentes del reactivo de Schiff está la pararosanilina, un componente de la fucsina básica, tratada con ácido sulfúrico; el compuesto final se denomina ácido sulfofucsídico.
Oxidamos los alcoholes que están en posición 1,2 glicol a carbonilo, que reaccionarán con el reactivo de Schiff al haberse convertido en grupos aldehído.
Una gran ventaja de la tinción histoquímica PAS es su capacidad de discriminación de tipos de glúcidos distintos, con pequeñas modificaciones de la técnica.
Reactivos:
- Ácido Periódico: 0.5 % p/v.
- Reactivo de Schiff: o Fucsina básica (CI: 42510): 1g.
- Solución de agua sulfurosa: o Baño de Ácido Sulfuroso o Agua sulfurosa: o Ácido Clorhídrico (HCl) 1N: 5 ml.
- Metabisulfito sódico 10 %: 6 ml.
- Agua (d): 100 ml.
- Colorante de contraste: Hematoxilina, Orange G o Van Gieson.
Preparación:
1) Fijación: Formol al 4 % o Líquido de Carnoy o Bouin.
2)Disolver la fucsina en 200 ml de agua destilada hirviendo.
3) Dejar enfriar hasta aproximadamente 50º C. y filtrar
4) Posteriormente agregar 20 ml de HCl 1N. Después enfriar hasta 25º C y añadir 1g de Bisulfito sódico o Metabisulfito potásico (sódico).
5) Mantener en la oscuridad. El liquido tarda unos 2 días o a veces 24h en tornarse de color amarillo que indica que está listo para su uso.
6) Añadir 2g de carbón activado, mezclar y filtrar hasta que desaparezca el color.
7) La solución debe conservarse en el refrigerador protegido de la luz.
1) Desparafinar e hidratar (xilol y decrecientes alcoholes)
2) Ácido periódico 0.5 % durante 5 min.
3) Lavar en agua destilada
4) Reactivo de Schiff durante 15- 30 min.
5) Aclarar en 3 baños de agua sulfurosa durante 2 min. Cada uno.
6) Lavar en agua corriente
7) Colorante de contraste
8) Lavar con agua corriente.
9) Deshidratar, aclarar y montar. Resultados: Material PAS +: rojo oscuro a magenta. Compuestos PAS +
* Los mucopolisacaridos ácidos no pueden ser oxidados por el ácido periódico y por eso son PAS - (ya que no aparecen los grupos carbonilos)
Controles de la técnica del PAS:
Es imprescindible realizar preparaciones testigo o de control que confirmen los resultados obtenidos, para ello suelen ser muy útiles las técnicas de bloqueo:
2) Ácido periódico 0.5 % durante 5 min.
3) Lavar en agua destilada
4) Reactivo de Schiff durante 15- 30 min.
5) Aclarar en 3 baños de agua sulfurosa durante 2 min. Cada uno.
6) Lavar en agua corriente
7) Colorante de contraste
8) Lavar con agua corriente.
9) Deshidratar, aclarar y montar. Resultados: Material PAS +: rojo oscuro a magenta. Compuestos PAS +
- Polisacáridos simples: como el glucógeno y la celulosa.
- Mucopolisacaridos neutros: se encuentran en el epitelio gástrico, en glándulas del duodeno y en cápsulas bacterianas, también en intestino y estómago.
- Mucoproteínas como son algunas mucinas del tubo digestivo y del árbol respiratorio o bronquial, también la tiroglobulina que está en el tiroides y otras hormonas
- Glucoproteínas del suero
- Glucolípidos: como los gangliósidos y cerebrosidos.
* Los mucopolisacaridos ácidos no pueden ser oxidados por el ácido periódico y por eso son PAS - (ya que no aparecen los grupos carbonilos)
Controles de la técnica del PAS:
Es imprescindible realizar preparaciones testigo o de control que confirmen los resultados obtenidos, para ello suelen ser muy útiles las técnicas de bloqueo:
- Bloqueo de grupos aldehídos en general
- Acetilación de grupos aldehídos situados en posición 1,2 glicol.
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