La tinción policrómica de Papanicolaou, ha sido y sigue siendo la tinción de rutina por excelencia para citología y citopatología.
Reactivos:
1) Hematoxilina:
Colorante básico que tiñe el núcleo por el carácter ácido que le proporcionan los ácidos nucleicos. Tiñe principalmente el núcleo de las células, y el citoplasma queda ligeramente manchado.
2) Orange G:
Colorante ácido que tiñe el citoplasma de algunas células que son un poco más densas, como las queratinizadas y los hematíes (por la hemoglobina que contienen). Los citoplasmas quedan teñidos de tonos naranjas.
Cuanto más anaranjado quede teñido el citoplasma, más “vieja” y terminal es la célula.
Resultado:
Protocolo:
Previamente tendremos que elaborar un filtro para filtrar la hematoxilina.
Utilizaremos células de muestra vaginal que citocentrifugaremos.
Fijaremos en etanol 96ºC durante 15-30 minutos.
A continuación aplicaremos la tinción:
1) Hidratar con una batería de alcoholes a concertaciones decrecientes (de 100% a 50%) tres minutos por cada coplin de alcohol, ir observando la superficie del cristal.
2) Agua, utilizaremos la del grifo ya que el agua de valencia es rica en cal. Será muy importante observar la superficie del cristal, hasta que este quede uniforme.
3) Hematoxilina de Harris. De 3 a 5 minutos (depende de su maduración).
Unos minutos antes de que finalice el tiempo, tendremos que transportar el coplin con la hematoxilina y las muestras a la pila, donde pasaremos el cestillo a otro coplin que llenaremos con agua del grifo a chorro constante (sin que incida directamente sobre la muestra) hasta que el agua salga trasparente, es entonces cuando lo llevaremos de vuelta a la mesa de tinción.
4) Diferenciar con alcohol clorhídrico 5 segundos.
5) Neutralizar con Carbonato de Litio 45 segundos o en nuestro caso, al tener aguas tan ricas en calcio, utilizaremos agua del grifo.
6) Lavar con agua del grifo rápidamente ya que de no ser así podrían haber perdidas de color.
7) Deshidratar con alcoholes a concentraciones crecientes (del 50% a 100%) dejaremos actuar en cada coplin 30 segundos, mientras que en los alcohol al 100% dejaremos actuar 10 minutos cada uno.
8) Orange G, de 3-6 min o 3 pases de 2 min.
9) Alcohol al 96% 2 pases de 1 min.
10) EA-50 o 65 de 3-6 minutos.
11) Etanol 96º 2 pases de 1 minuto.
12) Xilol 2 pases de 1 minuto.
13) Montar con Eukit.
Esquema:
Reactivos:
1) Hematoxilina:
Colorante básico que tiñe el núcleo por el carácter ácido que le proporcionan los ácidos nucleicos. Tiñe principalmente el núcleo de las células, y el citoplasma queda ligeramente manchado.
2) Orange G:
Colorante ácido que tiñe el citoplasma de algunas células que son un poco más densas, como las queratinizadas y los hematíes (por la hemoglobina que contienen). Los citoplasmas quedan teñidos de tonos naranjas.
Cuanto más anaranjado quede teñido el citoplasma, más “vieja” y terminal es la célula.
Resultado:
- Núcleos celulares : azules, negros, a veces violeta oscuro.
- Cromatina nuclear: azul.
- Núcleos de leucocitos (generalmente macrófagos): azul oscuro (los citoplasmas no se aprecian).
- Citoplasma de las células eosinófilas superficiales (y acidófilas en general): rosa, a veces rosarojizo/anaranjado.
- Citoplasma de las células con queratina: rojo-anaranjado o naranja.
- Citoplasma de las células cianófilas intermedias o superficiales (basófilos): azul, a veces verdoso.
- Eritrocitos : rojos.
Protocolo:
Previamente tendremos que elaborar un filtro para filtrar la hematoxilina.
Utilizaremos células de muestra vaginal que citocentrifugaremos.
Fijaremos en etanol 96ºC durante 15-30 minutos.
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| Citocentrífuga. |
A continuación aplicaremos la tinción:
1) Hidratar con una batería de alcoholes a concertaciones decrecientes (de 100% a 50%) tres minutos por cada coplin de alcohol, ir observando la superficie del cristal.
2) Agua, utilizaremos la del grifo ya que el agua de valencia es rica en cal. Será muy importante observar la superficie del cristal, hasta que este quede uniforme.
3) Hematoxilina de Harris. De 3 a 5 minutos (depende de su maduración).
Unos minutos antes de que finalice el tiempo, tendremos que transportar el coplin con la hematoxilina y las muestras a la pila, donde pasaremos el cestillo a otro coplin que llenaremos con agua del grifo a chorro constante (sin que incida directamente sobre la muestra) hasta que el agua salga trasparente, es entonces cuando lo llevaremos de vuelta a la mesa de tinción.
4) Diferenciar con alcohol clorhídrico 5 segundos.
5) Neutralizar con Carbonato de Litio 45 segundos o en nuestro caso, al tener aguas tan ricas en calcio, utilizaremos agua del grifo.
6) Lavar con agua del grifo rápidamente ya que de no ser así podrían haber perdidas de color.
7) Deshidratar con alcoholes a concentraciones crecientes (del 50% a 100%) dejaremos actuar en cada coplin 30 segundos, mientras que en los alcohol al 100% dejaremos actuar 10 minutos cada uno.
8) Orange G, de 3-6 min o 3 pases de 2 min.
9) Alcohol al 96% 2 pases de 1 min.
10) EA-50 o 65 de 3-6 minutos.
11) Etanol 96º 2 pases de 1 minuto.
12) Xilol 2 pases de 1 minuto.
13) Montar con Eukit.
Esquema:
ME GUSTA ,
ResponderEliminarMuy bueno el contenido...
ResponderEliminarGracias
Muy bueno el contenido...
ResponderEliminarGracias
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