sábado, 11 de abril de 2015

PROTOCOLO TINCIONES VI GIEMSA

Es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos, cortes histológicos y otro tipo de muestras biológicas.

Resultados:

  • Eritrocitos: Rojo ladrillo
  • Núcleos celulares: Morado
  • Granulaciones especificas: Rojo, rosa o morado
  • Citoplasmas: De rosa al azul (efecto giemsa)
  • Hueso: Azul
  • Bacterias y parásitos: Azul, menos las rikettsias que se ven violetas




Protocolo:

1) Desparafinar.
En la estufa 10 min a 60ºC o toda la noche a 37ºC.

2) Líquido intermediario, Xiol.

3) Hidratar aplicando alcoholes en concentraciones decrecientes (96% - 50%).

4) Sumergir en agua destilada (o de grifo) para que la muestra se hidrate, ya que la mayoría de los tintes tienen una base acuosa.

5) Solución de Giemsa (filtrada y comercial, o al 30% en agua destilada) durante 1 hora, a Tª ambiente.

6) Se lava con agua hasta que rebose.

7) Lavar con agua acética al 2% varias veces rápidamente, aunque puede llegar hasta 30 segundos (diferenciación)

8) Se lava con agua corriente hasta que rebose

9) Deshidratar con alcohol isopropílico (propanol) (2 cambios al menos) No usar etanol.

10) Se sumerge en las distintas cubetas de xilol durante 5 minutos cada una.

11) Tras este proceso, ya se puede montar
En el montaje, la muestra teñida y humedecida (del coplin de xilol) se cubre con un cristal (cubre) que se pega con producto llamado Entellan, intentando la formación de burbujas de aire, lo que daría lugar a artefactos al observar en el microscopio.

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